首先，培养室阴暗潮湿，空气脏，空气中含有大量杂菌，污染了食用菌。臭氧发生器或非衰减技术臭氧发生器（专业消毒设备，两者任选其一）用于消毒。臭氧杀菌浓度≥10ppm，达到杀菌浓度后继续启动30分钟，可有效杀灭各个角落内的各种霉菌和天然细菌。 二、接种室消毒不严格。接种室没有使用适当的方法进行有效消毒。采用“白黑”杀菌工艺，所谓“臭氧消毒”，需要臭氧消毒和静电消毒配套。 工人白天工作时使用臭氧消毒设备：如食品臭氧消毒机，近年来该设备也广泛应用于一些大型食品企业的包装、冷却、灌装环节，是真正意义上的食品企业专用臭氧消毒设备.在臭氧的情况下，使用尼科勒灭菌室；消毒过程如下：当机器开机时，室内含有细菌的空气被吸入机器内，在等离子静电场中施加0.5-12000伏的高压，产生高浓度的电离层，使含有细菌的空气迅速极化，高压电荷瞬间释放能量破坏微生物细胞壁，导致细菌死亡。在消毒杀菌中，人们可以在室内同时生活和生产，对人体无任何伤害；主要用于人在工作时同时进行臭氧杀菌消毒，使受控环境保持在“无菌无尘”标准。因为在车间消毒，人们可以同时在车间工作，所以杀菌机被称为食品臭氧消毒。该机为成熟的消毒技术，对人体无伤害，主要用于有人工作条件下的同步臭氧消毒。 工人晚上下班后使用静态消毒设备。一个细菌可以在 24 小时内繁殖数百甚至数百万个细菌。臭氧消毒能有效灭活各种细菌。臭氧杀菌后，必须进行严格的杀菌效果验证，确保食品安全，验收标准如下： 1、常规企业臭氧杀菌默认标准：气味臭氧有杀菌作用：臭氧浓度≥0.5ppm可去除异味； 0.5～1.0 PPM可杀灭空气中80%的天然细菌，浓度越高杀菌效果越好；需要注意的是，相对湿度<45%，臭氧对空气环境中的微生物几乎没有杀灭作用，≥60%时逐渐增加，95%时达到最大值。
2、产品质量企业标准要求高，10万级净化车间验收浓度≥10ppm，标准浓度≤60分钟；达到规定的浓度，再继续灭菌30分钟，完成完整的灭菌过程。 3、培养物未彻底消毒，被杂菌污染。杀菌不彻底的主要原因有： 1) 灭菌操作不当。 100℃杀菌6-8小时或121℃杀菌0.5-2小时可杀死常见杂菌的菌丝体和孢子。目前食用菌培养材料采用常压灭菌或高压灭菌的方法。粮食、粪草等物质在常压下很难杀菌，也不容易达到完全杀菌的效果。高压灭菌器效果更好。 2）培养材料不同。生产细菌所需的材料种类、培养材料中细菌的数量、含水量和pH值都会影响杀菌效果。应根据不同培养材料的特点选择相应的杀菌时间。 3）应变包装容器的影响。在种子生产中，通常使用瓶子或袋子来包装细菌。塑料袋传热很快，但玻璃瓶传热速度较慢。在同样的培养材料中，采用同样的杀菌方法，瓶装材料的杀菌时间比袋装材料的杀菌时间长。 4、菌株中含有杂菌。用于扩大培养的食用菌原菌株必须本身是纯净的，以保证菌株的均一性。如果食用菌菌株含有杂菌，会导致接种率下降。 五、接种人员操作不当。食用菌接种过程需要严格的无菌操作环境。如果操作不规范，很容易导致培养材料被杂菌污染。污染培养物的杂菌一般为接种室空气中的杂菌、菌袋表面的杂菌、接种器体表的杂菌等。 “白+黑”能有效控制杂菌污染问题，也能有效提高食用菌接种成功率。
